苹果褪绿叶斑病毒（apple chlorotic leafspot virus, ACLSV）是一种严重危害果树生长的潜隐性病毒，几乎在所有栽培苹果的国家和地区均有发生。ACLSV是纤毛病毒属（Trichovirus）的代表成员，可通过机械接种和嫁接传播。该病毒最早于1959年在大果海棠上发现，我国于1989年在苹果上初次发现该病毒。此后，在河北、山东、辽宁、内蒙、甘肃等11个省及直辖市均有报道，该病毒对果树生长及果品质量有极其严重的危害。

ACLSV在多数苹果品种及砧木上为潜隐状态，很难直观的从外部观察到症状。病毒在侵入植株体内完成复制后，有一个长距离的转运和扩散过程，以这种方式运输到植株的不同部位和组织，在此基础上，完成进一步的复制和增殖。在植物体内积累达到一定的量之后，就会对植株的正常生理活动产生干扰，因此，详细的了解病毒在植株体内的分布规律，是进一步揭示病毒致病机理的关键所在，同时也对无毒苗木的繁育具有重要的指导意义。

本研究采用实时荧光定量RT-PCR方法对苹果不同生长发育时期、不同组织部位ACLSV相对含量进行测定，阐明9月至翌年4月ACLSV 在苹果植株中的时空分布，以期为该病毒的准确诊断奠定基础。

ACLSV在苹果树体中的分布情况

2016年4月中旬，对苹果花期的一年生枝皮、二年生枝皮、花蕾、叶和芽5种不同部位的苹果组织进行采集和RNA提取，以苹果的nad-5基因作为内参基因，测定和分析了ACLSV在不同组织部位的相对含量。由图19-8可知，ACLSV在不同组织部位存在较大差异，ACLSV 在花中的相对含量显著高于其它部位，芽中的相对含量最低，ACLSV 在花中的相对含量约是芽的5倍；在二年生枝皮组织的相对含量高于一年生枝皮组织；在叶中的相对含量介于一年生和二年生枝皮组织之间。4月中旬，ACLSV在苹果植株中的相对含量由高到低依次为：花、二年生枝皮、叶、一年生枝皮、芽。

图19-8 4月中旬ACLSV在苹果树不同组织部位中的相对含量

注：不同小写字母表示处理间0.05水平差异显著（下同）

苹果不同树体方位ACLSV相对含量的差异

2015年9月中旬至2016年4月中旬，对树体东、南、西、北4个方位的一年生枝皮组织进行采集和RNA提取，以苹果的nad-5 基因作为内参基因，测定和分析了ACLSV在树体不同方位的相对含量。由图19-9可知，8个月中ACLSV的相对含量除4月外均是以南向最高，西向最低，位于西向与北向的较为接近，但同时又低于东向的相对含量。通过显著性差异分析，从2015年9月中旬至翌年4月中旬8个月中，南向的病毒相对含量显著高于西、北2个方向。

图19-9 苹果树体4个方位一年生枝条树皮组织中ACLSV的相对含量 

不同生长发育期一年生枝皮ACLSV的相对含量变化

2015年9月至2016年4月，每月中旬对苹果不同发育时期的一年生枝皮组织进行采集和RNA 提取，测定和分析了不同生长发育时期ACLSV 的相对含量，结果如图19-10所示，以9月中旬ACLSV的相对含量基准，病毒相对含量的变化趋势是先升高，后降低，再升高。从9月中旬至10月中旬呈大幅上升趋势，10月ACLSV的相对含量最高，达到病毒相对含量的最高峰；此后病毒相对含量下降，从12月至翌年2月ACLSV相对含量变化较小，即相对含量变化相对平缓，1月中旬相对含量最低，10月中旬的相对含量约是1月中旬相对含量的5-6倍；3月起呈上升趋势。

图19-10 苹果不同生长发育时期一年生枝皮组织ACLSV RNA的相对含量

本研究经过检测发现苹果盛花期，ACLSV在花中相对含量最高，约是幼芽的5倍，二年生枝皮中病毒相对含量高于一年生枝皮，病毒在叶与芽中的病毒相对含量低于枝皮组织。9月至翌年4月苹果一年生枝皮中的相对含量呈先升高、后降低、再升高的趋势，10月相对含量达到整个采集时期的最高峰。通过对不同方位的ACLSV进行检测，发现在整个检测时段内，树体南向的病毒相对含量最高，研究结果为ACLSV的准确检测与诊断提供了理论依据。